在做層析實(shí)驗的時(shí)候可能時(shí)常會(huì )遇到一個(gè)問(wèn)題：一次實(shí)驗可以上多少樣品呢？多也不是少也不是，上樣多了會(huì )造成一部分樣品損失或者達不到預期的分離效果，上樣少了無(wú)法充分使用層析柱還要增加重復實(shí)驗或者使用更大層析柱，真是件糾結的事情。我們今天要來(lái)給大家介紹的就是不同的層析柱應該如何確定上樣量。

　　層析柱上樣量由柱體積和所使用填料載量決定

　　柱體積（CV）：層析柱中裝填的填料的總體積，根據層析柱的截面積及填料裝填的高度計算得到。

　　載量：填料在一定條件下填料結合目的分子的能力，分為靜態(tài)載量和動(dòng)態(tài)載量。

　　靜態(tài)載量（有效載量）

　　在一定的條件下，可以結合在層析填料上的真實(shí)樣品的數量，它是使用真實(shí)的樣品和介質(zhì)充分浸潤飽和，然后測定結合在填料上的樣品總量。pH、離子強度、添加劑以及樣品等因素都會(huì )影響有效結合載量。實(shí)驗條件改變，有效結合載量也會(huì )變化。

　　動(dòng)態(tài)載量

　　在一定的運行條件下，可以結合在層析柱上的樣品數量。除pH，離子強度，添加劑以及樣品以外，運行流速也會(huì )影響動(dòng)態(tài)結合載量。一般來(lái)說(shuō)，流速越低，動(dòng)態(tài)結合載量越高。如果流速接近于零，動(dòng)態(tài)結合載量等于有效載量。

　　層析都是在一定流速下進(jìn)行的，故填料的動(dòng)態(tài)載量更能有效地用于上樣量的確定。對于特定填料或層析柱來(lái)說(shuō)，說(shuō)明書(shū)都會(huì )給出對于某種特定蛋白其動(dòng)態(tài)結合載量，同時(shí)給出相應的測定條件，可作為實(shí)際實(shí)驗中上樣量的參考。